实验步骤
1．用EcoRI和BamHI酶切pBV220（1g）（酶切方法见实验四），pBV220经纯化后待用。
2．用EcoRI和BamHI酶切pUCl8-IL DNA（4g），酶切好的600bp IL DNA片段用DNA回收试剂盒回收待用。
3．取0.2g酶切好的pBV220载体加0.2g 的600bp IL DNA片段，用T4DNA连接酶连接（见实验五）。
4．取连接产物转化JMl03感受态菌，涂布于加Amp的LB固体培养基上。
5．快速抽提质粒；酶切鉴定重组质粒。
6．用接种环取重组克隆于3ml 含50g/ml Amp的LB液体培养基的150×15mm试管中，斜置于30℃恒温摇床，200r/min培养过夜。
7．次日上午取过夜培养菌30l接种于3ml含50g/ml Amp的LB液体培养基的150×15mm试管内，分别接种6管。斜置于30℃恒温摇床，200r/min培养约3小时。
8．当细菌浓度生长到OD550 = 0.5～1.0时，取出5管移入42℃恒温培养摇床内，200r/min诱导表达，余下1管为不诱导表达的对照样品。
9．以1小时的间隔依次取出1管并做好标记，置于冰中待用。
10．诱导完毕后，将样品摇匀，各取1ml分别加入Eppendorf管中，10,000r/min离心5分钟，上清液用微量移液器轻轻吸去，再于离心机中10,000r/min离心5分钟，再吸去残留上清液。
11．将Eppendorf管在涡旋混旋器上振荡，使沉淀散开至不见块状物。
12．各管中加入SDS-PAGE电泳上样液50l振荡混匀，置于100℃水中，煮5分钟，取出于离心机中10,000r/min离心10分钟。
13．各管分别取15～20l于12% SDS-PAGE中电泳，40V过夜。
14．将胶剥下于考马氏亮蓝染色液中染色5小时以上。
15．胶于脱色液中脱色至透明。
16．结果分析，SDS-PAGE电泳分析结果，不经诱导的细菌没有特定位置的条带，诱导后的细菌随时间的不同表达的蛋白量不同，诱导4小时后基因的表达趋于稳定，最高表达量约为30%。
【提示】
1．表达菌株的过夜培养物接种，是为了在诱导表达时培养基中的细茵能尽量处于同步生长状态，以便于产物的大量表达。在安排实验时，前一天应考虑到将过夜菌接种培养。该实验的时间较长，第一次操作时，时间安排不当，当天可能做不完，而表达产物又不适合于过夜放置，应当予以注意。
2．一般在大肠杆菌高效表达真核基因时，所产生的产物常以包含体的形式存在，用超声仪破裂细菌后进行离心，表达产物存在于离心管底，而不在上清液内，因此当上清液内分析不到样品时，应考虑分析离心沉淀物，最好是第一次分析所表达的产物时，将两者同时进行电泳分析，以确定表达产物在宿主菌内的存在形式。
3．原核表达系统表达基因，其产物在宿主中的存在形式并不是固定不变的，随培荞基的营养状况、诱导培养的时间和表达效果的高低而不同。包含体产物一般不能直接用于常规层析方法进行纯化，必须用盐酸胍等非离子型强变性剂溶解，并用不同的方法将产物复性后才能进行常规分高纯化，否则会给后期实验带来不便。如果能将表达产物变成可溶性形式，将有利于后续实验的快速开展。表达菌培养时、营养状况好、诱导表达时间短、表达效率降低都有利于可溶性表达产物的形成。
4．宿主菌都有其自身的蛋白质，表达的产物在SDS-PAGE电泳时，其分子量可能会与宿主菌的蛋白质条带重叠，给分析结果带来麻烦。近到这种情况，一般采用以下几种办法来处理：①比较表达结果与对照结果中各条蛋白带的浓度，并选择几条肉眼看到浓度无差别的蛋白带为比较对照，寻找表达结果中是否有浓度增加的蛋白条带。如果有，则可进一步分析；②改变电泳胶的浓度（调整电泳胶的有效分辨范围），使蛋白重叠条带分开；③用抗血清或抗体对SDS-PAGE做免疫WesternBlot（免疫印迹实验），观察表达结果中是否有特异性条带出现。
5．表达产物观察不到时，很可能是目的基因与载体上启动子匹配不好。mRNA转录出来后，如果在SD序列或目的基因的ATG位点及附近出现有二级折叠结构，并且其茎环中茎的长度大于5bp时，会严重影响到蛋白质的翻译效率，产率极低。通过定点突变或更换载体使这类二级结构消除，可使表达效率提高10～100倍以上。