实验目的:
学 习DNA的Feulgen染色法,观察染色结果,了解反应原理。
实验原理:
核酸是细胞遗传的基本化学物质,它在生物的个体发育、生长、繁殖、遗传和变异等生命过程中起着极为重要的作用。
核酸的基本单位是核苷酸,是由上百个甚至几千万个核苷酸聚合而成的长链状高分子复合物。核苷酸由磷酸和核苷组成,核苷由戊糖和碱基组成。
磷酸
核糖
核酸:核苷酸 戊糖 脱氧核糖
核苷
碱基 RNA:腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶
DNA:腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶
根据核酸的化学结构和生物功能,分为二类:
(1)核糖核酸(ribonucleic acid,RNA):分布于胞质90%、核仁10%。
(2)脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA):分布于胞核99%、线粒体和叶绿体1%。
DNA显色原理:
弱酸(1N HCl)
DNA———→其上的脱氧核糖与嘌呤碱基之间的键打开—→使脱氧核糖的一
Shiff氏液
端形成游离的醛基———→紫红色化合物。
对照组:若用三氯醋酸或DNA酶处理抽提去细胞中的DNA,则不显色、为阴性。
实验材料与试剂:Carnoy氏液固定的组织块(小肠、洋葱根尖)、系列染色缸、盖玻片、树胶、大镊子、小镊子、滤纸、显微镜。
溶液:(1)0.5%偏重亚硫酸钠液
(2)无色品红液(shiff氏液)
(3)0.2%亮绿水溶液
(4)1N HCl:浓HCl(比重1.19)8.4ml,加蒸馏水至100ml。
(5)5%三氯醋酸