了解新生牛血清在细胞培养中的作用,掌握血清筛选技术。
实验原理
牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清(10%),首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等,其次它具有解毒作用,能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性;再次,它还能中止胰酶的作用,并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂,不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期只有一年,不同存放时期的血清的效力也不同。所以,当新购得的血清或要在开始一个重大试验的时候,应首先进行牛血清的筛选。
筛选时,通常选用正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞,也可以使正要准备培养的细胞。另外,最好用已知优质血清作对照。
仪器、材料和试剂
仪器
CO2 培养箱,超净工作台,微量加样器,灭菌锅
材料
96孔培养板,刻度吸管,移液管,试管,吸管,废液缸,血球计数板,HeLa细胞,Mel细胞
试剂
DMEM,不同批号的血清,胰酶,双抗