一、主要内容
了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。
(一)原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。
(二)操作:
将15g酵母悬浮于90ml 0.04mol/L氢氧化钠溶液中,并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后,冷却。离心(3000r/min)15分钟将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待RNA沉淀完全后,离心(3000r/min)3分钟。弃去清夜。用95%乙醇洗涤沉淀2次,乙醚洗涤沉淀一次后,再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
取200mg提取的核酸,加入3当量/升硫酸10ml,在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1.嘌呤碱:取水解液1ml加入过量浓氨水,然后加入约1ml 0.1mol/L硝酸银溶液,观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2.核糖:取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色,说明核糖的存在。
3.磷酸:取一支试管,加水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热,观察溶液是否变成兰色,说明磷酸是否存在。
二、课堂安排
每人一组进行实验。RNA提取可合作进行。注意观察现象。
思考题与习题
1. 了解RNA提取的其他方法。