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酶的特性(一)

2009-05-20 14:36:25      相关论文 相关书籍
Tags:酶 特性 生物化学 酶的特性(一)

一、主要内容
(一)酶的专一性原理
酶作用的专一性是酶与一般催化剂的主要区别之一。所谓酶作用的专一性仅对一种或一类相似的物质起一定的催化作用,而对甚物质则不能起催化作用。本实验以蔗糖酶(来源于酵母)及枯草杆菌α-淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例来说明酶作用的专一性。
淀粉和蔗糖缺乏自由醛基(苷羟基)无还原性。但在α-淀粉酶的作用下,淀粉很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖,使之具有还原性。在同样的条件下,α-淀粉酶不能催化蔗糖的水解,蔗糖酶能催化蔗糖水解生成具有还原性的葡萄糖,但不能催化淀粉水解。
本实验采用本尼迪克特(Benedict)试剂检测还原糖。
(二)温度对酶活性的影响原理
酶的催化作用受温度的影响很大。温度对酶化的反应有双重效应,一方面,温度上升可以使反应加快;另一方面,温度升高又可使酶因变性而失活。
各种酶的反应有其最适的温度,此时,酶的反应速度最快。与普通化学反应一样,在酶的最适温度以下,温度每升高10℃,其反应速度相应地增加1~2倍。
至于低温对酶促反应的影响,一般地说,在低温下(如0℃左右或更低)酶活力降低,但酶活性不受破坏。一旦升高温度也就能恢复其原有的催化活力。
本实验以枯草杆菌α-淀粉酶和蔗糖酶为例,说明温度对酶活性的影响。
(二)操作
1.取2支试管,各加入本氏试剂2ml,再分别加入1%可溶性淀粉溶液和2%蔗糖溶液各4滴,混合均匀后,放在沸水浴中煮2~3分钟,观察有无红黄色沉淀产生,纯净的淀粉和蔗糖应无红黄色沉淀产生。
2.α-淀粉酶的专一性试验
取3支试管,分别加入1%可溶性淀粉3ml,2%蔗糖溶液3ml及蒸馏水3ml。再向3支试管各添加α-淀粉酶稀释液1ml,混匀,放入37℃恒温水浴中保温,15分钟后取出,各加本氏试剂2ml,摇匀后,放在沸水中煮2~3分钟,观察有无红黄色沉淀产生。
3.蔗糖酶的专一性试验
取3支试管,分别加入1%可溶性淀粉溶液3ml、2%蔗糖溶液3ml及蒸馏水3ml,再向3支试管加蔗糖酶液1ml,混匀,放入37℃恒温水浴保温5分钟后取出,各本氏试剂2ml,摇匀,放在沸水浴中煮2~3分钟,观察有无红黄色沉淀产生。
4.温度对α-淀粉酶活性的影响
取3支试管,编号,各加入0.5%可溶性淀粉溶液3ml分别置于冰水浴,37℃水浴及沸水浴中,保温5分钟后,各缓缓加入1mlα-淀粉酶稀释液(试管勿从水浴中取出)继续保温10分钟,取出37℃水浴及沸水浴中试管置于冰水浴中冷却后,各加入碘-碘化钾溶液约一滴比较各管颜色,并解释现象。
5.温度对蔗糖酶活性的影响
取3支试管,编号,各加2%蔗糖液3ml,分别置于冰水浴,37℃及沸水浴中,保温5分钟后,各加1ml蔗糖酶液,继续保温10分钟,取出各加入2ml本氏试剂置于沸水浴中煮2~3分钟,比较各管颜色,并解释现象。
二、课堂安排
一人一组分工协作进行实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
1. 为什么酵母的蔗糖酶粗提液专一性作用不明显?
2. 酶的最适温度是否为酶的特征常数?
3. 为什么酶的反应时间越长,要求最适温度低一些?


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