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  • 2009-06-22siRNA实验成功要点
  • 1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA序列
    为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同.... [阅读全文]
  • 2009-06-22siRNA制备方法（how to get siRNA?）
  • In vitro
    A.. 化学合成法
    Ｂ、体外转录
    Ｃ、酶切长链dsRNA
    In vivo
    Ｄ、载体表达siRNA
    Ｅ、PCR合成siRNA表达元件A. 化学合成法
    1.方法简单、快速，需要时间短；获得的siRNA纯度高
    2.适用于短期体外实验.... [阅读全文]
  • 2009-06-21RNA的提取——ppt下载
  • 应用RNA对细胞和分子生物学的各个方面进行研究非常普遍。RNA存在于从简单的逆转录病毒到哺乳动物细胞的所有的生命形式之中。由于当前没有一种方法能够直接扩增RNA，因此，RNA的分离通常是决定实验结果质量的第一步，.... [阅读全文]
  • 2008-07-26琼脂糖凝胶电泳法鉴定DNA
  • 【实验目的】
    通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。

    【实验原理】
    琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖，是由D型和L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷键相连形成的线状高聚物（如下图所示）。.... [阅读全文]
  • 2008-07-26RNA 电泳实验技术
  • ①电泳RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。 ②用新的1XTBE 配制1. 2 %琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭（EB）直接加入凝胶中。 ③制备好的琼脂糖凝胶板.... [阅读全文]
  • 2008-07-26RNA酶活性的控制实验方法
  • （一）实验程序　　如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品：
    （１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻.... [阅读全文]
  • 2008-07-26siRNA对照解析方法大全
  • A．普通阴性对照
    1.siRNA实验应该有阴性对照；
    2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照；
    3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性；
    4．阴性对照需.... [阅读全文]
  • 2008-07-26一种快速鉴定RNA质量的新方法
  • 提　要:
    目的　建立一种快速鉴定RNA 完整性的方法。方法　在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上,结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。
    结果　提取的总RNA 用此方法电泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三条清晰的rRNA .... [阅读全文]
  • 2008-07-26哺乳动物细胞中mRNA的分离
  • 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯.... [阅读全文]
  • 2008-07-26RNA操作注意事项以及实验技巧
  • 操作注意事项：
    　　由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。
    　　归根究底，.... [阅读全文]
  • 2008-07-26RNA操作技术中的一般操作要求
  • 在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分.... [阅读全文]
  • 2007-12-09异硫氰酸胍和有机溶剂法提取RNA
  • 收集细胞，离心5000r/min ，5分钟，弃上清，加入异硫氰酸胍变性液（异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠25mmol/L，Sarkosy10.5%,β-巯基乙醇0.1mol/L）500ml，混匀，振荡10秒，加2 mol/L醋酸钠50ml，水饱和酚500m l和氯仿/异戊醇（49：1）100m l颠倒混合数秒钟，冰浴15分钟.... [阅读全文]
  • 2007-11-25哺乳动物细胞总ＲＮＡ的提取
  • 哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离　这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离.... [阅读全文]
  • 2007-11-25RNA Isolation Protocol from LCM Samples
  • RNA Isolation Protocol from LCM Samples
    1. Drop sample into 100 μl Lysis Solution and incubate for 30 min at 42°C
    Using sharp forceps, peel off the thermoplastic film containing the captured cells a.... [阅读全文]
  • 2007-11-25酵母RNA的提取
  • 酵母RNA的提取

    一、目的：

    学习稀碱法提RNA的原理与技术。

    二、原理：

    由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理.... [阅读全文]
  • 2007-11-25植物病毒RNA的提取
  • 植物病毒RNA提取 大多植物病毒RNA为单链RNA，并且其极性与mRNA极性相同，植物病毒RNA提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。
    　　一、材料
    　　提纯TMV病毒液（10mg/ml）。
    　　二、设备
    　　冷.... [阅读全文]
  • 2007-11-25细胞总RNA的提取
  • 细胞总RNA的提取一、准备 1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管 2、 打开冷冻离心机4℃预冷二、操作步骤：将Trizol、氯仿、冷PBS、.... [阅读全文]
  • 2007-11-25RNA 的制备与分析
  • RNA 的制备与分析RNA：主要由四种核糖核苷酸组成，即腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、尿嘧啶（U）。,天然的RNA并不象DNA那样呈双螺旋结构，而是单链线形分子。只有局部区域为双螺旋结构（约占RNA分子的50%）.... [阅读全文]
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