质粒DNA 的提取
实验目的
本实验通过质粒快速提取试剂盒的试剂对大肠杆菌中的重组质粒pET-22b 的
抽提,掌握质粒DNA 的小量制备方法,了解碱裂解法制备质粒DNA 的基本原理。
实验原理
载体是基因工程所必需的工具,它用于将目的基因运载到宿主细胞内进行克
隆与表达。常用的载体有质粒、λ噬菌体、M13 噬菌体、逆转录病毒DNA 和昆虫
病毒DNA 等,而质粒是最常用的载体。
实验步骤
1 收集菌泥。
2 悬浮细菌。
3 加入200μl 裂解液 (Solution 2),充分裂解菌体。
4 加入400μl 絮凝剂(Solution 3)。
5 15000rpm 离心10 分钟,无需低温离心。
6 将步骤5 中的上清转移到吸附柱(3S) 中,
12000rpm 离心1 分钟。
7 将吸附柱放入同一支收集管中,吸取洗涤液到吸附
柱,离心1 分钟。
8 重复步骤7 一次。
9 将吸附柱放入同一支收集管中,高速离心2 分钟。
10 在吸附柱(3S)膜中央加50μl 无菌双蒸水,室温高速离心1 分钟。

