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氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

2009-05-25 15:15:47      相关论文 相关书籍
Tags:感受态细胞 大肠杆菌 分子生物学 氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

实验目的
掌握重组DNA 质粒转化至大肠杆菌宿主的操作技术。
实验原理
带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量
复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,,该过程称之为转化过程。
受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂法)的处理后,细胞
膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。

大肠杆菌形态图


实验步骤
1 感受态细胞的制备:
1) 挑菌37℃培养。
2) 将过夜培养的细菌转接培养2-3 小时。
3) 将菌液置冰上10 分钟,4℃离心8000rpm 30 秒。
4) 用氯化钙溶液悬浮菌体,冰浴,离心弃去上清。
5) 氯化钙溶液悬浮菌体。
2 转化:
1) 取出感受态细胞,试剂A,无菌双蒸水和待转化的质粒DNA,均置冰盒内。
2) 取离心管管一支,将质粒、试剂A、无菌水,感受态细胞混匀冰浴20 分钟。
3) 在管内加入400ul LB 液体培养基,振荡培养10-40 分钟。
4) 涂布培养。


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