- 2009-05-26质粒DNA的小量制备
- 提取质粒DNA的目的是将细菌质粒DNA与菌体染色体DNA分开，并去除菌体残片及蛋白，以获取质粒DNA。目前广泛采用的SDS碱裂解法，其效果良好、经济且收得率较高。碱裂解的原理：碱裂解抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质....
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- 2009-05-26分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作
- 【实验目的】
（1）了解实验的常规仪器、设备、耗材。
（2）掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。
【实验内容】
一、验室的常规仪器、设备
(一) 温度控制系统：
1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的....
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- 2009-05-26分子生物学实验室常用试剂配制方法
- 一. 常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存....
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- 2009-05-25质粒DNA 的提取
- 质粒DNA 的提取
实验目的
本实验通过质粒快速提取试剂盒的试剂对大肠杆菌中的重组质粒pET-22b 的
抽提，掌握质粒DNA 的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA 的基本原理。
实验原理
载体是基因工程所必需的工....
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- 2009-05-25氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
- 实验目的
掌握重组DNA 质粒转化至大肠杆菌宿主的操作技术。
实验原理
带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量
复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,,该过程称之为转化过程....
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- 2008-06-20分析色谱与制备色谱的关系
- 分析色谱是制备色谱的基础。
当我们在分析色谱上 取得了良好的分离效果时，可以将其放大，应用到制备色谱上，由此，我们需要考虑调整上样量，流速，梯度：
1.上样量的调整：他与分析色谱柱和制备色谱柱....
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- 2007-11-26生化工程实验：酵母细胞固定化
- 固定化细胞通常采用包埋法、化学结合法和物理吸附法。我们这里使用包埋法。把细胞悬浮在海藻酸钠溶液中，然后滴进氯化钙溶液中，形成海藻酸钠凝胶小球。细胞包埋在凝胶的小孔中，制成固定化细胞。....
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- 2007-11-26斑点杂交
- 斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上,然后与核酸探针分子杂交，以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释,还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因诊断中经常用到,是研究基因表达的有力工具。但由于目的序列未与非目的序列分离,不能了解目的序列的长度。尤其当本底干扰较高时,难以区分目的序列信号和干扰信号。....
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- 2007-11-26菌落原位杂交
- 对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。....
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- 2007-11-26Northern杂交
- Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤维素滤膜上,然后与探针杂交。
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- 2007-11-26Southern杂交
- Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:
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- 2007-11-26RNA探针
- RNA探针 许多载体如pBluescript, pGEM等均带有来自噬菌体SP6或E.coli噬菌体T7或T3的启动子,它们能特异性地被各自噬菌体编码的依赖于DNA的RNA聚合酶所识别,合成特异性的RNA。在反应体系中若加入经标记的NTP，则可合....
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- 2007-11-26寡核苷酸探针
- 利用寡核苷酸探针可检测到靶基因上单个核苷酸的点突变。常用的寡核苷酸探针主要有两种:单一已知序列的寡核苷酸探针和许多简并性寡核苷酸探针组成的寡核苷酸探针库。单一已知序列寡核苷酸探针能与它们的目的序列准确配对,可以准确地设计杂交条件,以保证探针只与目的序列杂交而不与序列相近的非完全配对序列杂交,对于一些未知序列的目的片段则无效。....
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- 2007-11-26单链DNA(Single-strand DNA)探针
- 用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。采用单链探针则可解决这一问题。单链DNA探针的合成方法主要有下列两种: 1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2) 以RNA为模板, 用反转录酶合成单链cDNA探针。....
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