一、微生物形态学检查基本技术
细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一,它是细菌分类和鉴定的基础,可根据其形态、结构和染色反应性等,为进一步鉴定提供参考依据。
( 一)接种与分离方法
(二)细菌的培养方法
(三)细菌在培养基上生长特性
二、微生物培养与分离方法基本技术
大多数细菌均可以通过人工方法培养,而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。
( 一)显微镜检查
(二)不染色标本检查
(三)染色标本检查
细菌标本经染色后,由于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明对比,故在普通光学显微镜下可清楚地观察到细菌的形态特征(如细菌的大小、形状、排列等)和某些特殊结构(如荚膜、鞭毛、芽孢等),并可根据染色反应性对细菌加以分类鉴定。
2. 常用染色法
三、细菌的生物化学试验
各种细菌具有各自独特的酶系统,因而对底物的分解能力不同,其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物,可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌,称为细菌的生物化学试验或称生化反应。生物化学试验的方法很多,主要有以下几类:
(一)碳水化合物的代谢试验
(三)碳源和氮源利用试验
(四)酶类试验技术
(五)抑菌试验基本技术
1.氰化钾试验
2.O/129试验
3.新生霉素敏感试验
4.杆菌肽敏感试验
5.Optochin敏感试验
(六)细菌的生物化学试验的其它试验
A.克氏双糖铁或三糖铁琼脂培养基试验
B.氢氧化钾拉丝试验
四、血清学试验基本技术
血清学试验是根据抗原与相应的抗体在适宜的条件下,能在体外发生特异性结合的原理,用已知抗体或抗原来检测未知抗原或抗体。因抗体主要存在于血清中,抗原或抗体检测时一般都要采用血清,故体外的抗原抗体反应亦称为血清学试验或血清学反应。血清学试验包括血清学鉴定和血清学诊断。血清学鉴定即用含已知特异性抗体的免疫血清(诊断血清)去检测患者标本中或培养物中的未知细菌或细菌抗原,以确定病原菌的种或型。血清学诊断是指用已知抗原检测病人血清中的相应抗体,以诊断感染性疾病的方法。血清学试验是临床微生物学检验的重要方法之一。血清学试验基本类型包括凝集反应、沉淀反应和补体结合反应等。
(一)凝集反应
颗粒性抗原(细菌、红细胞、乳胶等)与相应抗体可发生特异性结合,在一定条件下(电解质、pH、温度、抗原抗体比例适合等)出现肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应。参与反应的抗原称凝集原,抗体称为凝集素。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应两大类。
五、分子生物学技术在微生物检验中的应用
分子生物学技术的迅速发展,拓展了微生物学检验方面的应用空间。该技术具有敏感、特异、安全和快速等特点,在微生物检验中发挥着日益重要的作用。本节简要介绍分子生物学技术在微生物检验中的应用,具体检测方法参见有关专著或试剂盒说明书。
六、自动化微生物鉴定和药敏分析系统在微生物检验中的应用
(一)微生物数码鉴定法:
早在七十年代中期,一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。这些技术的应用,为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序,大大提高了细菌鉴定的准确性。目前,微生物编码鉴定技术已经得到普遍应用,并早已商品化和形成独特的不同细菌鉴定系统。如API、Micro-ID、RapID、Enterotube和Minitek等系统。这种鉴定系统是自动化鉴定系统的基础。
(二)自动化的微生物鉴定和药敏试验分析系统
自动化的微生物鉴定和药敏试验分析系统在临床微生物实验室的应用,为微生物检验工作者对病原菌的快速诊断和药敏试验提供了有力工具。鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生化反应鉴定细菌的基础,而试验结果的准确度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、培养物浓度、孵育条件和结果判定等。大多鉴定系统采用细菌分解底物后反应液中pH的变化,色原性或荧光原性底物的酶解,测定挥发或不挥发酸,或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌。
药敏试验分析系统的基本原理是将抗生素微量稀释在条孔或条板中,加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育,通过测定细菌生长的浊度,或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解,观察细菌的生长情况。在含有抗生素的培养基中,浊度的增加提示细菌生长,根据判断标准解释敏感或耐药。
1.半自动化细菌鉴定和药敏分析系统
(三)自动化的血液细菌培养系统
(四)结核分枝杆菌快速检测系统